Applications

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Quelques exemples d’application :

Biodégradation et exemples de photodégradation du 2-aminobenzothiazole par des microorganismes

Traitement d’échantillons automatisé

But : L’analyse des échantillons par HPLC nécessite un traitement préalable. Le protocole développé pour ôter l’alginate sur lequel les souches Rhodococcus Rhodochrous sont immobilisées, utilise une phase immobilisée SPE (solid phase extraction). Ce protocole doit être miniaturisé et automatisé.

Intérêts : Gérer plusieurs dizaines d’échantillon en parallèle. Conditionner les échantillons recueillis en microvial. Paramètres : Détermination du Recovery (%) (Qté échantillon recueilli/Qté échantillon déposé) Vérifier l’absence de contamination croisée.

Protocole employé pour la purification de l'ABT et de ses métabolites

Test de criblage de transcétolase par fluorescence

But : Déterminer la cinétique de la réaction catalysée par l’enzyme transcétolase (TK), grâce au suivi de la fluorescence de l’umbelliférone (molécule fluorescente, abs = 365 nm, émission = 452 nm) au cours du temps.

Intérêts : La plateforme automatisée permet de réaliser plusieurs expériences en parallèle et à petite échelle en nous assurant d’une grande reproductibilité et d’un débit compatible avec le criblage ultérieur de banque(s) de mutants obtenus par évolution in vitro.

Principe du test fluorescent d'activité de TK

Résultats obtenus : Paramètres statistiques

  • limites de détection (LOD) et limites de quantification (LOQ), selon les tampons choisis.
  • Détermination du Z score (paramètre qui permet d’évaluer la pertinence d’un test de criblage avant son utilisation éventuelle en haut débit, HTS screening).

Dosage de l’ATP par la luciférase/luciférine

But : Déterminer la concentration en ATP dans une gamme dynamique de 2x10-12 à 2x10-9 moles/litre grâce à la réaction entre la luciférine et l’ATP, catalysée en présence de luciférase et d’oxygène (voir schéma présenté ci-contre).

Dosage de l'ATP par le couple luciférase/luciférine

Intérêts :

  • Le lecteur Safire® fonctionnant en mode luminescence peut se substituer à un luminomètre.
  • Le coût de l’enzyme luciférase est élevé. En travaillant en microplaques jusqu’à des quantités inférieures à 100µL, il peut être minimisé.

Résultats :

  • Gamme dynamique de mesure de l’ATP
  • Protocole en macrocuve modifié pour l’utilisation en microplaques